Preparasi Reagen Kerja QIAamp Viral RNA Mini Kit

Berikut ini adalah langkah yang saya gunakan dalam melakukan preparasi reagen kerja untuk digunakan dalam proses ekstraksi RNA dari sampel. Langkah yang Anda gunakan mungkin ada perbedaan tergantung kit insert dari pabrikan. Pastikan Anda mengikuti panduan di kit insert yang disertakan bersama reagen.

Alat

1. 1 buah gelas ukur 100 mL
2. 2 buah micropipette adjustable 20-200 \(\mu\)L
3. 1 buah vortex mixer
4. 1 buah microtube rack

Bahan

1. QIAamp Viral RNA Mini Kit (250 Rx Cat#52906) cukup untuk ekstraksi 250 sampel berisi:
   1. 250 buah QIAamp Mini Spin Columns dalam Collection Tubes 2 mL
   2. 750 buah Collection tubes 2 mL
   3. 10 botol Buffer AVE 2 mL (tutup ungu)
   4. 5 botol Carrier RNA (poly A) 310 \(\mu\)g (tutup merah)
   5. 5 botol Buffer AVL 31 mL
   6. 1 botol Buffer AW1 98 mL (konsentrat)
   7. 1 botol Buffer AW2 66 mL (konsentrat)
2. 300 mL etanol absolut
3. 1 buah tip 200 \(\mu\)L
4. 1 buah permanent marker
5. 2 buah microtube 500 \(\mu\)L untuk aliquot larutan Carrier RNA

Prosedur yang dilakukan

Preparasi Buffer AW1

1. Menambahkan 130 mL etanol absolut ke dalam botol berisi 98 mL konsentrat Buffer AW1 menggunakan gelas ukur 100 mL (100 + 30)
2. Menandai tutup botol bahwa etanol telah ditambahkan
3. Menuliskan tanggal penambahan etanol di tutup botol
4. Diperoleh 228 mL larutan Buffer AW1
   1. Setiap ekstraksi satu sampel dibutuhkan larutan Buffer AW1 500 \(\mu\)L
   2. Larutan yang telah dibuat diperkirakan cukup untuk ekstraksi 456 sampel
   3. Perlu diperhitungkan kehilangan larutan saat proses pipetting
5. Menutup dan menyimpan larutan Buffer AW1 di suhu ruang

Preparasi Buffer AW2

1. Menambahkan 160 mL etanol absolut ke dalam botol berisi 66 mL konsentrat Buffer AW2 menggunakan gelas ukur 100 mL (100 + 60)
2. Menandai tutup botol bahwa etanol telah ditambahkan
3. Menuliskan tanggal penambahan etanol di tutup botol
4. Diperoleh 226 mL larutan Buffer AW2
   1. Setiap ekstraksi satu sampel dibutuhkan larutan Buffer AW2 500 \(\mu\)L
   2. Larutan yang telah dibuat diperkirakan cukup untuk ekstraksi 452 sampel
   3. Perlu diperhitungkan kehilangan larutan saat proses pipetting
5. Menutup dan menyimpan larutan Buffer AW2 di suhu ruang

Preparasi Larutan Carrier RNA

1. Mengambil botol tutup merah berisi 310 \(\mu\)g carrier RNA dalam bentuk lyophilized
2. Membuka tutup dan menambahkan 310 \(\mu\)L buffer AVE ke dalam botol tutup merah berisi carrier RNA menggunakan micropipette 200 \(\mu\)L (160 + 150)
3. Menutup botol dan mencampur larutan dengan baik menggunakan vortex mixer
4. Diperoleh larutan Carrier RNA sejumlah 310 \(\mu\)L
   1. Larutan ini dapat digunakan bersama 31 mL Buffer AVL untuk proses ekstraksi sekitar 55 sampel
   2. Larutan Carrier RNA harus disimpan pada -30°C hingga -15°C
   3. Siklus freeze-thaw hanya tiga kali
   4. Pastikan dibagi ke dalam aliquot dalam jumlah yang memadai dan setiap periode kerja hanya melakukan thawing larutan carrier RNA sesuai volume yang dibutuhkan
5. Membuat 2 aliquot larutan carrier RNA dalam microtube 500 \(\mu\)L dan menyimpannya dalam suhu -20°C
6. Menyimpan sisa Buffer AVE di suhu ruang dengan menuliskan tanggal buka di botol